病原菌的实验室诊断

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病原菌的实验室诊断一般包括显微镜检查、病菌的分离培养、鉴定及动物试验。

(1)显微镜检查

①触片与涂片的制备。若待检样本是病变组织(肝、脾等)可做触片进行检查，方法是：取清洁载玻片在酒精灯两面略灼烧，冷却后使用。用消毒剪刀及镊子从病料中取一小三角形病变组织块，轻轻接触载玻片，晾干后备用。若待检样本是血液，可取一滴血液置于玻片一端，然后用另一玻片以一定角度与血液接触，使血液沿玻片边缘均匀散开，然后向玻片的另一端拉或推，即可摊成薄薄的一层涂片。若待检样本是分泌物、肠内容物或菌落，可事先在玻片上滴加一滴生理盐水或磷酸缓冲液，然后将待检物取少许与之混合均匀，并用接种环均匀摊成薄薄的一层涂片。所摊成的涂片易薄不易厚。然后使其自然干燥后备用。

②触片或涂片的固定。有两种固定方法，一种是火焰固定法，即将载玻片无样本的一面在火焰上迅速通过3－4次，样本可得到固定。另一种是化学固定法，即用化学固定剂(如甲醇、酒精或丙酮等)滴于载玻片的样本上或将载玻片置于固定剂的玻璃染缸中静置1分钟，取出后晾干备用。

③染色。根据不同目的，选择应用不同的染色方法，如革兰氏染色、姬姆萨染色、美兰染色或瑞氏染色等。

④镜检。先用低倍镜找到良好的视野，然后用油镜观察细菌的形态特征与染色特性。

(2)病菌的分离培养与鉴定 选择含菌量高、病变明显的病变组织以及适宜的培养基，用无菌操作方法进行分离培养。取纯培养物进行培养特性、生化特性及血清学检查鉴定。

(3)动物试验 在鸡传染病病原诊断中，动物试验是十分重要的，一般是以与发病鸡同日龄、同品系的SPF(无特定病原)鸡为实验动物，用分离到的纯培养物进行攻毒试验，复制疫病，并能在人工发病鸡中还能得到原接种菌的纯培养物。若无SPF鸡，至少要用从未接触该病菌或疫苗的非免疫健康鸡做发病试验。