薄层斑点面积法

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薄层斑点面积法 薄层色谱中，色谱斑的面积大小与样品量之间存在一定的关系，所以可测定色斑面积大小以求得样品含量。

但由于各个作者所用的层析条件和所研究的化合物不同，提出几种不同的关系式：

❶ 样品量的对数与色斑面积成线性关系，如以A表示色斑面积，W表示样品量。则

❷ 样品量的对数与色斑面积平方根或线性关系

❸ 样品量的对数与色斑面积平方根的对数成线性关系

❹ 样品量与色斑面积成线性关系

❺ 样品量与色斑面积的平方根成线性关系

至于哪一种线性关系适用于被测化合物，要通过试验来决定。目前，样品的对数与色斑面积的平方根成线性关系，使用范围较普遍。

例如穿心莲内酯加成物薄层定量：用穿心莲A104标准品和穿心莲样品点于硅胶板上，用氯仿－甲醇－正丁醇(2∶2∶1)为展开剂展开，干后，用Kedde试剂(3，5二硝基苯甲酸甲醇液和氢氧化钾甲醇液等量混合)显色。

用透明纸覆盖于薄层上，绘出色斑的大小，再将此纸覆盖在毫米座标纸上，读出面积大小。依据物质面积平方根()与物质重量对数(logW)成正比，可用两种方法求出logW值。

❶ 标准曲线法

式中W为样品量，W_s为标准品量，A为样品面积，A_s为标准品面积，A_d为样品稀释液的面积，d为稀释度。